Kleinostheim wurde wahrscheinlich im 6. Jahrhundert als Ossenheim von den Franken gegründet und 975 erstmals urkundlich erwähnt. tausend Jahre lang war es kirchlich und eng mit dem Stift St. Peter und in Aschaffenburg verbunden.
Am 21. Januar 1945 erlebte der den schrecklichsten Tag seiner Geschichte. Bei einem wurden mehr als 500 Gebäude beschädigt oder zerstört 61 Menschen fanden den Tod. Daran die 1995 neugestaltete Gedenkstätte auf dem Friedhof.
1951 wurde die dritte Laurentiuskirche in mehr als 1000jährigen Geschichte der katholischen Gemeinde 1955 unweit von hier die Markuskirche für junge evangelische Gemeinde.
Kleinostheim kam im Jahr 1814 zu Bayern zuvor gehörte es (seit 10. Jahrhundert) zu Kurmainz .